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尽管合理设计在改变蛋白酶特异性方面的成功有限,但定向进化已被用于在切割位点之前或之后改变首选残基。
然而,TEV蛋白酶作为生化工具确实有局限性。它很容易通过自切割(自溶)失活,尽管这可以通过内部切割位点的单个S219V突变来消除。单独表达的蛋白酶的溶解性也很差,但是已经进行了几次尝试以通过定向进化和计算设计来提高其溶解度。还表明,可以通过与麦芽糖结合蛋白融合来改善表达,该蛋白充当溶解度增强伙伴。
据报道,TEV蛋白酶在4°C时活性降低10倍。TEV蛋白酶在34°C以上的温度下会失去活性。
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